细菌在显微镜下被计数和观察，通常采用的是显微镜直接计数法，这种方法借助血细胞计数板或细菌计数板等特制的计数工具，在显微镜下直接观察和计数细菌。以下是细菌在显微镜下被计数和观察的具体步骤和原理：

一、原理

显微镜直接计数法利用血细胞计数板或细菌计数板上的精确刻度和容积，将小量待测样品的悬浮液置于计数板上的计数室内，于显微镜下直接计数细菌。这种方法直观、快速，操作简单。

二、步骤

制备细菌悬液：

取适量细菌样品，用无菌生理盐水或其他适当的缓冲液稀释至适当浓度，以便在显微镜下清晰观察。

加样：

将清洁干燥的血细胞计数板或细菌计数板盖上盖玻片，用无菌吸管或滴管将稀释好的细菌悬液滴加在计数板的一侧，使菌液靠毛细作用自动进入计数室。

显微镜观察：

将计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后转换成高倍镜进行计数。

调节显微镜的光线和焦距，使菌体和计数室线条清晰可见。

计数：

在显微镜下计数计数室内的细菌数量。通常选取计数室中的几个中方格（如5个中方格）进行计数，然后计算出每个中方格的平均细菌数。

根据计数板的规格（如每个大方格包含多少个小方格）和样品的稀释倍数，计算出原液中每毫升所含的细菌数。

三、注意事项

样品处理：在制备细菌悬液时，要确保样品的稀释倍数适当，以便在显微镜下清晰观察细菌。如果菌液过浓，可能会导致细菌重叠计数；如果菌液过稀，则可能难以找到细菌。

计数准确性：在计数时，要确保每个细菌都被清晰观察到，避免漏计或重复计数。对于位于方格线上的细菌，通常只计数相邻两边及其夹角上的细菌。

显微镜调节：在观察过程中，要适时调节显微镜的光线和焦距，以获得最佳的观察效果。

四、观察技巧

染色观察：为了更清晰地观察细菌的形态和结构，可以对细菌进行染色处理。常用的染色方法包括革兰氏染色、吉姆萨染色等。染色后，细菌的形态和结构会更加明显，有助于准确计数和观察。

使用油镜：对于较小的细菌，可以使用显微镜的油镜（高倍镜）进行观察。油镜的放大倍数更高，分辨率更好，能够更清晰地观察细菌的形态和结构。

五、其他方法

除了显微镜直接计数法外，还有其他一些方法可以用于细菌的计数和观察，如稀释涂布平板法、光电比浊法等。这些方法各有优缺点，可以根据实验目的和条件选择合适的方法。

概括起来，细菌在显微镜下被计数和观察是一个细致且系统的过程，需要掌握正确的操作方法和观察技巧。通过显微镜直接计数法，可以准确、快速地获得细菌的数量和分布信息。